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標(biāo)題: 光合細(xì)菌對(duì)鯉魚(yú)非特異性免疫功能的影響 [打印本頁(yè)]
作者: cjlittlepig 時(shí)間: 2012-7-4 16:37
標(biāo)題: 光合細(xì)菌對(duì)鯉魚(yú)非特異性免疫功能的影響
本帖最后由 cjlittlepig 于 2012-7-4 16:45 編輯
摘自《水利漁業(yè)》
摘要：實(shí)驗(yàn)組光合細(xì)菌質(zhì)量濃度分別為2.5、5.0、10.0 g/m3，在第1、7、14、21、28天檢測(cè)鯉魚(yú)血液白細(xì)胞吞噬活性和血清溶菌酶活性等指標(biāo)。結(jié)果表明，該光合細(xì)菌制劑可以提高鯉魚(yú)白細(xì)胞的吞噬活性，增強(qiáng)血清溶菌酶活力。鯉魚(yú)的非特異性免疫功能隨著光合細(xì)菌制劑濃度的增加和潑灑時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)增強(qiáng)趨勢(shì)。
關(guān)鍵詞：光合細(xì)菌 鯉魚(yú) 吞噬功能；溶菌酶活性
隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，養(yǎng)殖產(chǎn)量的提高，水產(chǎn)動(dòng)物疾病頻發(fā)成為嚴(yán)重威脅水產(chǎn)業(yè)的一個(gè)突出問(wèn)題。面對(duì)這一問(wèn)題，水產(chǎn)工作者們開(kāi)始尋找有效的解決方法。20世紀(jì)50年代抗生素廣泛地應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)，70年代人們認(rèn)識(shí)到其在帶來(lái)巨大效益的同時(shí)也帶來(lái)許多副作用⋯1，因此，人們開(kāi)始尋找更加有效健康的藥物。近年來(lái)，維生素、中草藥、脂多糖、甲殼質(zhì)、肽聚糖，微生態(tài)制劑等免疫增強(qiáng)劑成為魚(yú)病防治研究的新熱點(diǎn)。微生態(tài)制劑不僅可凈化水質(zhì)，無(wú)藥物殘留，不產(chǎn)生抗藥性，而且可以促進(jìn)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)，提高其對(duì)環(huán)境的耐受力和應(yīng)激力，產(chǎn)生非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，提高機(jī)體免疫力[2]。我們研究光合細(xì)菌制劑對(duì)魚(yú)類(lèi)免疫機(jī)能的影響，探討其作用機(jī)理，為微生態(tài)制劑作為魚(yú)類(lèi)疾病防治的藥物提供科學(xué)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 試驗(yàn)魚(yú)鯉來(lái)自湖北宜昌市養(yǎng)殖基地.體質(zhì)健壯，無(wú)病元傷，質(zhì)量(80±7.5)g，共200尾。
1.1.2 養(yǎng)殖條件
水泥池4個(gè)(3.0 m×3.0 m×0.5m)，每個(gè)池子放5O尾鯉，1號(hào)池為對(duì)照組。水溫20～25℃ ，溶氧5～6 mz／L，pH為6.8左右。1周換水1次(換池水的50％)。馴養(yǎng)2周后開(kāi)始試驗(yàn)。
1.1.3 飼料及投喂飼料購(gòu)于武漢海大飼料有限公司，為l號(hào)鯉魚(yú)配合飼料。每天投喂2次，投餌率3％～5％，以吃飽剩少許為準(zhǔn)。
1.1.4 金黃色葡萄球菌制備
將金黃色葡萄球菌接種于淡水魚(yú)類(lèi)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，28℃下培養(yǎng)24-48 h。無(wú)菌生理鹽水(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.65％)洗下菌落，并稀釋成一定濃度，加入終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的福爾馬林，28℃滅活24 h，用無(wú)菌生理鹽水清洗3次，調(diào)整細(xì)菌密度至1×108／ml，保存于4℃冰箱中備用。
1.1.5 微生態(tài)制荊
試驗(yàn)所用光合細(xì)菌制劑(PSB)系華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)所培養(yǎng)，主要成分為沼澤紅假單胞菌，菌密度為5億～10億／g。實(shí)驗(yàn)組每7d投放菌液1次，每次劑量為1.0 g／m3，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行35 d。
1.1.6 溶壁微球菌購(gòu)于中科院北京微生物研究所中國(guó)普通微生物菌種保藏中心。
1.2 方法
1.2.1 溶壁微球菌的配制
將溶壁微球菌涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，28℃ 下培養(yǎng)過(guò)夜，以制備溶壁微球菌粉末，具體操作見(jiàn)參考文獻(xiàn)[3]。
1.2.2 血清及血細(xì)胞的收集
從鯉魚(yú)尾靜脈采血，一部分直接加入Eppendorf(1.5ml尖頭離心管)中以制備血清，用于溶菌酶測(cè)定，另一部分用來(lái)(無(wú)菌肝素鈉)抗凝，供測(cè)定白細(xì)胞吞噬活性。
1.2.3 吞噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定
參考文獻(xiàn)[4]的方法。每次從尾靜脈取血1ml，置于含0.5ml肝素溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2％)的試管中混勻，加入約0.5 mL的金黃色葡萄球菌液，充分混勻后于25℃ 下水浴60 min。水浴期間每隔10 min搖勻1次。取上述混合液涂片，每個(gè)血樣涂5片。自然晾干后滴加甲醇固定5～7 min，蒸餾水沖洗，Gien~a染色1～1.5 h，自來(lái)水沖洗后再用蒸餾水沖洗，晾干。油鏡觀察記錄結(jié)果。吞噬活性分別以吞噬百分比(Phagocytic Percentixge，PP)和吞噬指數(shù)(Phagocyticindex，PI)表示：
吞噬百分比(PP)=(100個(gè)吞噬細(xì)胞中參與吞噬的細(xì)胞數(shù)／100)×100％，
吞噬指數(shù)(PI)=(吞噬細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌總數(shù)／參與吞噬的吞噬細(xì)胞數(shù))×100％
1.2.4 溶菌酶活力的測(cè)定
主要依據(jù)文獻(xiàn)[5,6]的方法進(jìn)行。用0.067 mol／L PBS(pH 6.4)將溶壁微球菌配成0.2 mg／mL的菌懸液，每個(gè)樣品取3ml菌懸液，吸取40μL血清加入到3 mL菌懸液中混勻后立刻在540nm下測(cè)定A0值。然后在28℃ 水浴中溫育30min，取出后置于4℃水浴中以終止反應(yīng)，再測(cè)定A值，按公式計(jì)算溶菌酶活力u=( A0一A)／A0。
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2012-7-4 16:35 上傳
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作者: cjlittlepig 時(shí)間: 2012-7-4 16:37
本帖最后由 cjlittlepig 于 2012-7-4 16:49 編輯
2 結(jié)果
2.1 光合細(xì)菌對(duì)鯉魚(yú)吞噬功能的影響
光合細(xì)菌制劑處理組與對(duì)照組的鯉魚(yú)白細(xì)胞吞噬活性見(jiàn)表1。
結(jié)果顯示，光合細(xì)菌制劑處理的鯉魚(yú)，吞噬細(xì)胞的吞噬活性比對(duì)照組要高，且隨著時(shí)間的增加而增強(qiáng)。t檢驗(yàn)表明，3個(gè)試驗(yàn)組白細(xì)胞的吞噬百分比和吞噬指數(shù)均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。
2.2 光合細(xì)菌對(duì)鯉魚(yú)血清中溶菌酶活力的影響
測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。
施用光合細(xì)菌制劑后，鯉魚(yú)血清中溶菌酶的活力有明顯的提高，10.0 g／m3組的溶菌酶活力變化最大，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈增高趨勢(shì)，第28天達(dá)到最高水平。經(jīng)t檢驗(yàn)，施用了光合細(xì)菌的3個(gè)實(shí)驗(yàn)組鯉魚(yú)血清溶菌酶水平都明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。1 g／m3組的效果最好，這與制劑使用說(shuō)明吻合，明顯地提高了鯉魚(yú)血清溶菌酶的活力，從而增強(qiáng)了鯉魚(yú)非特異性免疫功能以及抵抗病原微生物感染的能力。
作者: cjlittlepig 時(shí)間: 2012-7-4 16:38
本帖最后由 cjlittlepig 于 2012-7-4 16:52 編輯
3 討論
關(guān)于光合細(xì)菌對(duì)魚(yú)類(lèi)血清中溶菌酶的影響，目前國(guó)內(nèi)尚未有研究報(bào)道，更多的是作為水質(zhì)凈化劑用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的研究，且取得了很大的成功，研究結(jié)果在日本、東南亞和我國(guó)臺(tái)灣等地得到了普遍的應(yīng)用[7] 。孫艦軍等[8]把光合細(xì)菌拌人飼料投喂中國(guó)對(duì)蝦22 d后發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)蝦的溶菌酶活力比對(duì)照組提高53.4％，而我們的實(shí)驗(yàn)在第28天后所得結(jié)果顯示溶菌酶活力提高超過(guò)了100％，這可能是研究的對(duì)象、藥物的施用技術(shù)以及環(huán)境條件不同所造成的。本試驗(yàn)的結(jié)果表明，施藥7 d后開(kāi)始產(chǎn)生作用，并且在第28天效果最高。從結(jié)果看，制劑的作用效果隨時(shí)間延長(zhǎng)呈增強(qiáng)趨勢(shì)，這與簡(jiǎn)紀(jì)常等[2]研究中草藥提高建鯉溶菌酶活力的結(jié)果有不符之處，關(guān)于其持續(xù)作用時(shí)間還需進(jìn)一步的研究。
關(guān)于光合細(xì)菌對(duì)魚(yú)類(lèi)白細(xì)胞吞噬活性的影響，目前尚未發(fā)現(xiàn)報(bào)道，而其它的免疫增強(qiáng)劑對(duì)魚(yú)類(lèi)白細(xì)胞的吞噬活性影響則有相關(guān)報(bào)道。劉云等[9]用甲殼胺添加于飼料中可提高鯽魚(yú)吞噬細(xì)胞的吞噬能力。本試驗(yàn)施用光合細(xì)菌制劑后，白細(xì)胞的吞噬活性得到了明顯的提高，但是施用劑量和施用方法有待進(jìn)一步研究。作為一種益生菌制劑，光合細(xì)菌制劑對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的病害防治前景十分廣闊.值得在今后養(yǎng)殖生產(chǎn)中大力推廣。在微生態(tài)制劑的研究中也存在許多問(wèn)題[10]，比如優(yōu)良菌種的篩選，菌劑的保存技術(shù)、施用技術(shù)和劑量等，都有待深人地研究。
作者: 逆游的魚(yú) 時(shí)間: 2012-7-4 17:43
哦、原來(lái)如此啊
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